答：沒(méi)有分裝試劑。R&D Systems公司不會(huì)分裝，也沒(méi)有授權(quán)任何公司進(jìn)行分裝。目前市場(chǎng)上所謂的“RD分裝試劑”是沒(méi)有*的3無(wú)產(chǎn)品，R&D Systems公司不承擔(dān)任何“RD分裝試劑”的售后服務(wù)。在此，建議廣大客戶和經(jīng)銷商從R&D Systems中文上公布的正規(guī)經(jīng)銷商處訂購(gòu)。

 

答：帶有AB的抗體是用G蛋白純化的，帶有IgG成分；帶有AF的抗體經(jīng)G蛋白純化后又經(jīng)抗原親和層析純化。所以，AF抗體為抗原特異性的IgG，而AB抗體含有與目標(biāo)分析物非特異性的IgG。BAF是生物素化的AF抗體；MAB是單克隆抗體。

答：IgG的分子量是150kDa。它由兩條50kDa的重鏈和兩條25kDa的輕鏈組成。

答：R&D Systems不做抗原表位的定位?？贵w是針對(duì)整個(gè)免疫原（列在數(shù)據(jù)表中）的。

答：多克隆抗體有多個(gè)抗原表位識(shí)別位點(diǎn)。抗體是針對(duì)整個(gè)免疫原（列在數(shù)據(jù)表中）的。

答：Thehalose是一種非還原糖（分子量為342.1）, 它在梅拉德式（Maillard）反應(yīng)中與氨基酸和蛋白都不作用。它存在于許多植物和動(dòng)物中。有報(bào)道稱Thehalose是穩(wěn)定蛋白抗御冰凍的zui有效抗凍劑，它使得蛋白抵御水分的能力增加從而使產(chǎn)品在重新溶解時(shí)不容易產(chǎn)生沉淀物。

答：Trehalose主要用于在冰凍和脫水過(guò)程中保護(hù)蛋白。它是非還原糖，在干粉化時(shí)呈非結(jié)晶狀。

 

 

 

答：因?yàn)橛袃煞N不同的TUNEL方法可檢測(cè)細(xì)胞凋亡。*種方法采用TdT酶（末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶）將生物素化的核苷酸加到組織中的DNA片段的3'-羥基端。加入正離子可使這種標(biāo)記更有效，經(jīng)生物素化的核苷酸可用streptavidin-HRP共軛物和底物來(lái)檢測(cè)。

第二種方法仍采用TdT酶（末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶）將核苷酸加到樣本中的DNA片段的3'-羥基端，但采用5-溴脫氧尿苷（BrdU）標(biāo)記而非生物素，再用生物素化的抗5-溴脫氧尿苷（BrdU）抗體來(lái)檢測(cè)。采用這種方法的細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒包括：TA100 TACS-XL基本原位細(xì)胞凋亡試劑盒；TA200 TACS-XL DAB原位細(xì)胞凋亡試劑盒；TA300 TACS-XL藍(lán)色標(biāo)記原位細(xì)胞凋亡試劑盒；TA400 TACS-XL補(bǔ)充細(xì)胞凋亡試劑盒；

答：Caspase活性測(cè)試為在細(xì)胞裂解液中檢測(cè)蛋白酶活性提供了簡(jiǎn)捷方便的手段。當(dāng)對(duì)專一Caspase的多肽底物被裂解時(shí)，釋放出的指示分子可用普通讀光儀或熒光讀板儀來(lái)做定量測(cè)定。將從細(xì)胞凋亡樣本得到的信號(hào)同未經(jīng)誘導(dǎo)的對(duì)照樣本進(jìn)行比較，可以確定Caspase活性增加的倍數(shù)，而Caspase酶活性是同檢測(cè)到的信號(hào)直接成正比。

答：R&D Systems的Caspase活性測(cè)定試劑盒可作為半定量測(cè)試。檢測(cè)結(jié)果用于測(cè)量在細(xì)胞凋亡細(xì)胞中與未經(jīng)誘導(dǎo)細(xì)胞中的Caspase活性倍數(shù)的增加。實(shí)驗(yàn)時(shí)，采用本底對(duì)照（無(wú)細(xì)胞裂解液或無(wú)底物的反應(yīng)）。如果本底對(duì)照也有一定的讀數(shù)，這一讀數(shù)應(yīng)當(dāng)在記算倍數(shù)增加之前從試驗(yàn)數(shù)據(jù)中差減。

答：Caspase活性檢測(cè)用于測(cè)定不同Caspase的蛋白酶的活性，表達(dá)為比未誘導(dǎo)樣本的倍數(shù)增加。Caspase ELISA試劑盒用于測(cè)定不同Caspase在樣本中的含量，以pg /mL定量表達(dá)。

答：大多數(shù)caspase會(huì)裂解所有的底物，它們根據(jù)Michaelis-Menton動(dòng)力學(xué)趨于選擇某一底物而非另一底物，但沒(méi)有任何底物是對(duì)某一Caspase專一的。比如，Caspase 3和Caspase 7都可裂解DEVD底物；Caspase 9、4、5 都可裂解LEHD。R&D Systems為每一Caspase選擇了它所適宜的底物。 如果反應(yīng)進(jìn)行的太久，一些Caspase會(huì)激活另一些Caspase。

答：所有的Caspase活性檢測(cè)試劑盒中的細(xì)胞裂解液都是一樣的。所以，可用它裂解細(xì)胞，和用于多種Caspase活性的測(cè)試。

答：所有R&D Systems的Caspase抑制劑在N端有苯甲氧碳基（Z-）和FMK功能組，它們可穿孔細(xì)胞，是不可逆轉(zhuǎn)的。

答：R&D Systems提供多種重組Caspase酶，它們是理想的陽(yáng)性對(duì)照。如果試驗(yàn)者自己想建立一陽(yáng)性對(duì)照，有許多可以產(chǎn)生細(xì)胞凋亡的陽(yáng)性對(duì)照的方法都已發(fā)表。如果將細(xì)胞同2 mM星形孢菌素（Staurosporin）溫育2小時(shí)，可誘導(dǎo)絕大多數(shù)細(xì)胞類型進(jìn)入細(xì)胞凋亡。R&D Systems有文獻(xiàn)資料列舉了對(duì)Caspase如何產(chǎn)生陽(yáng)性對(duì)照，可向我們的技術(shù)服務(wù)索取。

 

 

 

答：R&D Systems為人的Quantikine ELISA試劑盒提供三重對(duì)照組。請(qǐng)同我們以便確定產(chǎn)品的目錄號(hào)。

答：首先要考慮的是重組蛋白的質(zhì)量會(huì)高出試劑盒的可測(cè)試范圍數(shù)倍，必須將重組蛋白稀釋多次才能得到試劑盒的測(cè)試范圍。一般來(lái)說(shuō)是從mg/毫升稀釋到pg/毫升，在這中間光是移液管的誤差就達(dá)到了可測(cè)量的水平。

其次要考慮的是R&D Systems的免疫測(cè)試方法測(cè)量的蛋白水平是用一種抗體捕獲的、用第二種抗體測(cè)定的，這種測(cè)定是在試劑盒研發(fā)時(shí)與標(biāo)準(zhǔn)蛋白校正過(guò)的。這些經(jīng)過(guò)測(cè)定的早期標(biāo)準(zhǔn)蛋白成為基本校正物，后來(lái)的標(biāo)準(zhǔn)都同它校正。這樣不同生產(chǎn)批號(hào)的免疫測(cè)定試劑盒將是一致的。這些基本校正物蛋白質(zhì)量的測(cè)量方法也許與你的試劑管中蛋白質(zhì)量的測(cè)定方法有所不同。

答：競(jìng)爭(zhēng)ELISA基于競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合技術(shù)，即樣本中的待測(cè)分子與固定量的標(biāo)記的同樣分子（我們一般用堿性磷酸酶作為標(biāo)記）同時(shí)與固定在孔板上的抗體的同一結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)，參照標(biāo)準(zhǔn)曲線，試驗(yàn)數(shù)據(jù)值是定量的。

答：夾層ELISA采用對(duì)樣本中分析物的特異的抗體作為固定化的捕獲抗體，然后用第二個(gè)帶標(biāo)記的抗體作檢測(cè)，檢測(cè)抗體對(duì)分析物也是專一的。當(dāng)參照標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，試驗(yàn)數(shù)據(jù)值是定量的。

答：直接ELISA是將被測(cè)的分析物直接包膜在微孔板表面，然后用測(cè)試抗體來(lái)證實(shí)被測(cè)分析物的存在。當(dāng)與重組蛋白（標(biāo)準(zhǔn)曲線）進(jìn)行參照時(shí)，試驗(yàn)數(shù)據(jù)值是半定量的。

答：R&D Systems Parameter品牌的ELISA試劑盒可以做6點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線、對(duì)照和41個(gè)樣本（每個(gè)樣本做雙份）。

答：大多數(shù)R&D Systems 的Quantikine品牌人的ELISA試劑盒可以做標(biāo)準(zhǔn)曲線、對(duì)照和40個(gè)樣本（每個(gè)樣本做雙份）。

答：Quantikine品牌的小鼠或大鼠的ELISA試劑盒中的每一微孔板可以做標(biāo)準(zhǔn)曲線、對(duì)照和39個(gè)樣本（每個(gè)樣本做雙份）。Quantikine品牌的小鼠或大鼠的ELISA試劑盒中，有些有兩個(gè)微孔板，有些只有一個(gè)微孔板。

答：在R&D Systems本部，我們用Costar的微孔板（目錄#2592）。Costar的是（800）492-1110。

答：為了ELISA，我們采用Serological Proteins的BSA（目錄#82-045）。Serological Proteins的是（815）937-8270。

答：R&D Systems的Quantikine ELISA試劑盒是一個(gè)完整的試劑盒。它包含了一個(gè)已包板的微孔板、酶標(biāo)抗體、標(biāo)準(zhǔn)蛋白、稀釋劑、底物、終止劑、洗液和微孔板密封膜。所有試劑盒對(duì)實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書中所列樣本都經(jīng)充分驗(yàn)證，確保高質(zhì)量。

答：DuoSet ELISA開(kāi)發(fā)系統(tǒng)提供了足夠的捕獲抗體、測(cè)試抗體、標(biāo)準(zhǔn)蛋白和Streptavidin-HRP，可以做大約十五個(gè)96孔微孔板的實(shí)驗(yàn)。我們還提供了樣本試驗(yàn)流程和與這一系統(tǒng)配套的試劑。DuoSet ELISA開(kāi)發(fā)系統(tǒng)主要是為高通量篩選細(xì)胞培養(yǎng)的上清液所設(shè)計(jì)，但熟悉ELISA研發(fā)的實(shí)驗(yàn)人員已成功將其推廣到血清和血漿樣本的使用。

答：R&D Systems的抗體配對(duì)是一個(gè)自己動(dòng)手的產(chǎn)品。R&D Systems建議此產(chǎn)品的使用者在免疫測(cè)試的開(kāi)發(fā)方面應(yīng)很有造詣。使用者必須以經(jīng)驗(yàn)為依據(jù)來(lái)決定捕獲抗體和測(cè)試抗體的*濃度。R&D Systems的重組細(xì)胞因子并未經(jīng)ELISA校正，所以在使用前必須經(jīng)ELISA做質(zhì)量校正。更多有關(guān)ELISA開(kāi)發(fā)的信息可參照我們的《ELISA開(kāi)發(fā)指導(dǎo)》 （: http://www.rndsystems.com/tsg_detail_objectname_elisa_development.aspx） 。

答：R&D Systems的Quantikine牌子的ELISA試劑盒是一種比色法檢測(cè)，需要一臺(tái)標(biāo)準(zhǔn)讀光儀配備有合適的濾光片可用于讀數(shù)和光波長(zhǎng)校正。QuantiGlo ELISA試劑盒采用了一種熒光底物，計(jì)數(shù)為光流明或相對(duì)光單位（RLU）。因此，QuantiGlo ELISA試劑盒需要有熒光讀光儀。這種熒光讀光儀需設(shè)置在：1.0分鐘的滯待時(shí)間；1.0秒/孔的讀數(shù)時(shí)間；累計(jì)狀態(tài)；自動(dòng)獲取開(kāi)啟。R&D Systems使用Dynex Technologies的熒光讀光儀。

答：高靈敏Quantikine ELISA試劑盒一般用于非常低量的細(xì)胞因子的檢測(cè)，比如正常人（健康狀態(tài)時(shí)）的血清和血漿。當(dāng)普通Quantikine試劑盒一般檢測(cè)不到（或幾乎檢測(cè)不到）正常人血清和血漿中的細(xì)胞因子，可選擇高靈敏Quantikine。我們建議實(shí)驗(yàn)者先查閱文獻(xiàn)資料來(lái)確定試驗(yàn)的測(cè)試范圍以選擇所需的試劑盒的種類。

答：很遺憾，R&D Systems尚未采用組織勻漿作為樣本對(duì)Quantikine系列的試劑盒做效果驗(yàn)證。如果要決定試劑盒是否可用于未經(jīng)檢定的樣本，實(shí)驗(yàn)者先做一個(gè)“摻入和回收預(yù)試驗(yàn)”。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，實(shí)驗(yàn)者將樣本分為兩份：一份中摻入一定量的試劑標(biāo)準(zhǔn)，然后做一稀釋系列（一般稀釋到1:16），再將摻入過(guò)的一份同未摻入的一份相比。采用以下的公式來(lái)計(jì)算回收率（%）：測(cè)試值（pg /毫升）/ 期待值（pg /毫升）x 100% = % 回收率。一般來(lái)說(shuō)，回收率在80-120%可認(rèn)為是可接受的。但是，可接受范圍應(yīng)由每一實(shí)驗(yàn)室自行決定。這種方法可用于檢定未被R&D Systems檢定的任何樣本。我們還有更加詳細(xì)的“摻入和回收”的實(shí)驗(yàn)步驟，可向我們的技術(shù)服務(wù)部索取。我們也可進(jìn)一步查閱文獻(xiàn)看一看是否有其他試驗(yàn)人員用我們的產(chǎn)品做過(guò)不同的樣本，或不同的屬種。

答：因?yàn)橄♂寗┦羌尤氲剿械目字?，?biāo)準(zhǔn)和被測(cè)樣本都被同樣稀釋，所以樣本的濃度可從標(biāo)準(zhǔn)曲線讀出，而不需作稀釋調(diào)整。

答：在任何情況下，我們都不支持超出確定范圍的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。在我們確定的測(cè)試范圍，我們保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性。

答：靈敏度是統(tǒng)計(jì)中大于零的可測(cè)到的zui低值。它是通過(guò)本底信號(hào)和試驗(yàn)的可變性計(jì)算出來(lái)的。靈敏度是將20個(gè)零復(fù)制物的中值加兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差從標(biāo)準(zhǔn)曲線換算成分析物的濃度。而zui低標(biāo)準(zhǔn)是我們可以放心的、仍可與標(biāo)準(zhǔn)曲線成直線相關(guān)的zui低點(diǎn)，因而是可定量的。

答：如果試劑盒（RD1-, RD5-, RD6-）中的稀釋劑有相同的組件號(hào)和批量號(hào)，它們可以互換。R&D Systems做“整個(gè)試劑盒的質(zhì)量控制”，就是說(shuō)，我們不支持不同批號(hào)之間的替代。在任何情況下，微孔板和共軛物都不可互換。

答：如果組件號(hào)相同，洗液在相同類型的試劑盒之間（普通試劑盒之間，或高靈敏度試劑盒之間）是可以互換的。但是，普通Quantikine試劑盒中的洗液不能用于高靈敏度的試劑盒，在普通Quantikine試劑盒中的洗液含有磷酸，會(huì)干擾高靈敏度Quantikine試劑盒中由NADPH驅(qū)動(dòng)的信號(hào)擴(kuò)增。

答：有些細(xì)胞分子會(huì)粘到玻璃或聚苯乙烯（polystyrene），但不粘聚丙烯。

答：你可用細(xì)胞培養(yǎng)液來(lái)做起始的稀釋，直接移液到微孔板的zui終的1:10稀釋可使用校正物來(lái)稀釋。

答：有些RD1測(cè)試稀釋劑的確有不同程度的沉淀物。在這種情況下，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)步驟手冊(cè)中已做紀(jì)錄。

答：R&D Systems在研發(fā)和質(zhì)控我們絕大多數(shù)的Quantikine ELISA試劑盒時(shí)，采用4-相參數(shù)的曲線擬合（又名為4-pl或sigmoidal曲線擬合）。一般來(lái)說(shuō)，它比log-log和直線有更好的曲線擬合。如果數(shù)據(jù)分析不可用4-pl的話，log-log是下一個(gè)的選擇。

答：500 rpm使用的是0.12英寸的震蕩軌道。如果你的震蕩器用更大的震蕩軌道，500 rpm的確是過(guò)快了。在這種情況下，你應(yīng)根據(jù)R&D Systems的建議重新調(diào)整震蕩速度。你可拿一個(gè)多余的96孔微孔板，加入洗液，洗液的量與實(shí)驗(yàn)時(shí)孔中的溶液量一致；封板后，調(diào)整震蕩器的速度，直到液體在孔的上部劇烈旋轉(zhuǎn)但不濺到封膜上或產(chǎn)生泡沫為止。

答：zui大但不是*的兩個(gè)原因，可能是移液誤差和清洗方式。你可參照我們的《如何成功地操作ELISA指導(dǎo)》，：http://www.rndsystems.com/tsg_detail_objectname_elisa.aspx

答：主要有兩個(gè)原因：一，在絕大多數(shù)的樣本中細(xì)胞因子的含量非常高，如不經(jīng)稀釋，讀數(shù)將高于標(biāo)準(zhǔn)曲線；二，也是zui普遍的原因我們建議做稀釋，是將樣本中的干擾或基質(zhì)效應(yīng)稀釋掉。 

答：R&D System不建議對(duì)任何Quantikine ELISA延長(zhǎng)溫育時(shí)間。而且，當(dāng)實(shí)驗(yàn)步驟改變了，我們無(wú)法保證Quantikine ELISA的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。R&D System做“整個(gè)試劑盒的質(zhì)量控制”，就是說(shuō)我們無(wú)法支持改變過(guò)的實(shí)驗(yàn)步驟，因?yàn)樗鼈兾唇?jīng)質(zhì)量控制。延長(zhǎng)溫育時(shí)間、或提高溫育溫度以縮短溫育時(shí)間會(huì)提高實(shí)驗(yàn)的本底（又名空白或零標(biāo)準(zhǔn)）。這樣一來(lái)，樣本和標(biāo)準(zhǔn)中的低量細(xì)胞因子會(huì)測(cè)不到，因?yàn)樵龈吡说谋镜仔盘?hào)將從所有孔中的數(shù)值中差減。

答：很多方面都會(huì)影響到顏色的產(chǎn)生。比如：

1）    BSA的干擾。選擇不含脂肪酸的ELIS*別的BSA很重要，可以降低球蛋白對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾。R&D Systems建議使用Serological Proteins的BSA（目錄#82-045）。

2）    非室溫下的試劑在使用時(shí)會(huì)抑制信號(hào)；如果室溫過(guò)低，信號(hào)也會(huì)被抑制。

3）    如果使用了未表明為“高結(jié)合性ELISA”的微孔板，捕獲抗體同微孔板的結(jié)合就不牢固，從而導(dǎo)致測(cè)試的顏色產(chǎn)生過(guò)低。

4）    任何試劑，如果配制出錯(cuò)、儲(chǔ)藏不當(dāng)、或已過(guò)期，都將出現(xiàn)這一問(wèn)題。

5）    讀板時(shí)使用的波長(zhǎng)同低物的波長(zhǎng)不一致。

答：若使用一家公司的抗體而用另一家公司的標(biāo)準(zhǔn)的帶來(lái)問(wèn)題是它們會(huì)有不同的免疫活性（或不同的抗體與重組蛋白的結(jié)合力）。這種現(xiàn)象的出現(xiàn)是因?yàn)樽鳛闃?biāo)準(zhǔn)的重組蛋白同作為抗體免疫原的重組蛋白在蛋白序列或折疊中會(huì)有所不同，如果蛋白序列或折疊的不同發(fā)生在抗體結(jié)合部位，就會(huì)引起抗體對(duì)重組蛋白標(biāo)準(zhǔn)的不識(shí)別或識(shí)別很差。

 

 

 

答：R&D Systems的ELISpot測(cè)試采用了ELISA技術(shù)。先將對(duì)某一細(xì)胞因子專一的單克隆抗體固定于微孔板的PVDF膜上，再將經(jīng)適當(dāng)刺激誘導(dǎo)的細(xì)胞移液到微孔中，然后將整個(gè)微孔板放置在保濕的370CCO₂培養(yǎng)箱中溫育特定的時(shí)間；在溫育的這段時(shí)間里，固定化的抗體與它們周圍分泌細(xì)胞析出的細(xì)胞分子結(jié)合；洗掉細(xì)胞和未結(jié)合的分子，加入對(duì)這一細(xì)胞因子有特異性的生物素化的多克隆抗體；清除未結(jié)合生物素化的抗體，加入經(jīng)streptavidin共軛的堿性磷酸酶；將未結(jié)合的酶從反應(yīng)中洗除后，再加入底物溶液（BCIP/NBT）；一個(gè)藍(lán)黑色的沉淀（斑點(diǎn)）在細(xì)胞因子產(chǎn)生的位置形成，每一斑點(diǎn)代表了分泌特定細(xì)胞因子的細(xì)胞。這些斑點(diǎn)可用自動(dòng)讀板系統(tǒng)（不同于普通讀光儀）讀出；或者，這些斑點(diǎn)也可用立體顯微鏡手控讀出。

答：ELISA實(shí)驗(yàn)測(cè)量的是樣本中某一細(xì)胞因子的總量（一般表示為pg或ng /mL）；ELISpot實(shí)驗(yàn)并不測(cè)定樣本中某一細(xì)胞因子的量，而是測(cè)定有多少細(xì)胞在分泌某一細(xì)胞因子。

答：R&D Systems的ELISpot試劑盒含有：對(duì)某一細(xì)胞因子有特異性的單克隆抗體（這一抗體已預(yù)先固定在微孔板的PVDF膜上）、生物素化的檢測(cè)抗體，Streptavidin共軛的堿性磷酸酶、BCIP/NBT產(chǎn)色物、和重組細(xì)胞因子陽(yáng)性對(duì)照。試劑盒備有試驗(yàn)所需所有的用品，試驗(yàn)者不需再進(jìn)行優(yōu)化。

     

R&D Systems的ELISpot開(kāi)發(fā)試劑分為兩個(gè)必需組分，必須分別購(gòu)買對(duì)細(xì)胞因子具有特異性的開(kāi)發(fā)組件和ELISpot藍(lán)色組件。對(duì)細(xì)胞因子專一的開(kāi)發(fā)組件包括對(duì)細(xì)胞因子特異的捕獲抗體和檢測(cè)抗體；ELISpot藍(lán)色組件（目錄#SE002）對(duì)所有R&D Systems的對(duì)細(xì)胞因子特異的開(kāi)發(fā)組件都適用，它包含Streptavidin-堿性磷酸酶和BCIP/NBT產(chǎn)色物。

答：因?yàn)閹в蠵VDF膜的微孔板很靈敏，我們不能將微孔板做成條狀的形式。如溫育多次，我們將不能保證使用微孔板所得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果；因?yàn)槲⒖装宀辉贌o(wú)菌，所以未使用的微孔可能有污染。我們并不擔(dān)心*次使用時(shí)污染會(huì)有，因?yàn)榇蠖鄶?shù)的細(xì)胞培養(yǎng)液都含抗菌素，而溫育時(shí)間又相對(duì)較短。我們選擇帶有的PVDF微孔板是因?yàn)樗鼙葮?biāo)準(zhǔn)ELIS*別的聚丙乙烯（polystyrene）微孔板提供更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

答：這個(gè)問(wèn)題比較難回答，根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求而異。使用多少細(xì)胞有許多變量：比如細(xì)胞的大小、細(xì)胞的類型、分泌細(xì)胞因子的細(xì)胞的多少、誘導(dǎo)細(xì)胞的方法等。剛開(kāi)始時(shí)，需要做一些細(xì)胞的稀釋（如，將每孔10,000,000個(gè)細(xì)胞稀釋到100,000甚至到10,000個(gè)細(xì)胞）來(lái)決定可形成明顯斑點(diǎn)的*細(xì)胞數(shù)。例如，如果微孔中的細(xì)胞已達(dá)到單層融合狀而大部分細(xì)胞分泌待測(cè)的細(xì)胞因子，形成的斑點(diǎn)就很難分開(kāi)，這樣就很難定量檢測(cè)到分泌所測(cè)的細(xì)胞因子的細(xì)胞數(shù)；在這種情況下，應(yīng)做一系列稀釋（titration），降低細(xì)胞數(shù)。如果在同樣的單層融合狀細(xì)胞中只有少數(shù)細(xì)胞分泌待測(cè)的細(xì)胞因子，形成的斑點(diǎn)就會(huì)很明顯，就很容易被定量測(cè)定；在第這種情況下，細(xì)胞數(shù)目就是合適的。所以，必須針對(duì)不同細(xì)胞類型和誘導(dǎo)方法來(lái)確定每孔中應(yīng)加入細(xì)胞的*數(shù)目。

答：這是基于96孔微孔板的測(cè)試。除去陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、本底（空白）和檢測(cè)抗體對(duì)照外，還剩下88孔，可做44個(gè)樣本（每個(gè)樣本做雙份）。

 

 

答：R&D Systems有一政策就是不給我們的蛋白和抗體產(chǎn)品提供生產(chǎn)日期或產(chǎn)品期限，從而限制產(chǎn)品的使用期限。在適當(dāng)?shù)膬?chǔ)存條件下，蛋白和抗體趨于穩(wěn)定多年。這些儲(chǔ)存條件包括以干粉形式儲(chǔ)存蛋白、或在蛋白濃度高于0.1毫克/毫升時(shí)冷凍（-20°C或-80°C）儲(chǔ)存蛋白并減少冷凍/解凍的次數(shù)。請(qǐng)參照每一產(chǎn)品插頁(yè)中的指示。我們公司常規(guī)的質(zhì)量控制保證每一產(chǎn)品在售出時(shí)都具有生物活性。在實(shí)驗(yàn)者收到產(chǎn)品后，我們無(wú)法控制產(chǎn)品的儲(chǔ)存狀況。我們?cè)敢援a(chǎn)品保證書來(lái)替代產(chǎn)品期限。在正常實(shí)驗(yàn)條件下，我們保證R&D Systems的所有的產(chǎn)品將達(dá)到或超過(guò)我們公布的標(biāo)準(zhǔn)。

答：如果某一特定用途未列入我們的資料單，R&D Systems內(nèi)部沒(méi)有更多的數(shù)據(jù)。我們的技術(shù)服務(wù)可以查閱我們的文獻(xiàn)庫(kù)，看一看是否有其他實(shí)驗(yàn)人員發(fā)表過(guò)這一產(chǎn)品的這類用途、樣本類型、和/或種屬。

答：CF代表無(wú)攜帶物。一般來(lái)說(shuō)，每1 mg的細(xì)胞因子都加有50 mg的BSA（攜帶蛋白）以穩(wěn)定細(xì)胞因子。無(wú)攜帶物的形式不含任何BSA。通常來(lái)說(shuō)，帶有BSA的細(xì)胞因子比不帶攜帶物的細(xì)胞因子可在更低的濃度保存、有更長(zhǎng)的貨架壽命。如果細(xì)胞因子是用于加入細(xì)胞/組織培養(yǎng)或作為ELISA的標(biāo)準(zhǔn)，可采用帶有BSA的細(xì)胞分子。當(dāng)細(xì)胞因子是用于原位應(yīng)用、標(biāo)記細(xì)胞因子、或BSA會(huì)產(chǎn)生干擾的實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)采用無(wú)攜帶物的細(xì)胞因子。

答：R&D Systems的重組人EPO（超純）目錄#286-EP-250，和我們的重組人EPO（組織培養(yǎng)級(jí)）目錄#287-TC-500，都有同樣的單位對(duì)質(zhì)量的轉(zhuǎn)換。一單位的rhEPO大約是10 ng。

答：R&D Systems采用Serological Proteins的餾分V BSA（目錄#81-068）來(lái)重新配制蛋白溶液。Serological Proteins的是（815）937-8270。

答：Fc可以穩(wěn)定分子。R&D Systems利用Fc部分有趨于成雙聚體的傾向，創(chuàng)建有生物活性的雙聚體分子。以受體/ Fc嵌合體為例，與其可溶性受體相比，這種融合體輔助我們創(chuàng)建了可與它的配位體產(chǎn)生更高親和力性的受體。R&D Systems提供同樣的Fc部分作為對(duì)照。目錄是：110-HG，人的重組IgG/Fc。

答：采用酸性溶劑來(lái)重新配制某些細(xì)胞因子是非常關(guān)鍵的。因?yàn)橛行┘?xì)胞因子的等電子點(diǎn)很高，它們有*的疏水性。如不使用這種酸性重配劑， 這些細(xì)胞因子就很難全部溶于溶液中。因?yàn)橥瑯釉?，我們還建議用同樣的酸性重配劑來(lái)儲(chǔ)存這些細(xì)胞因子的分裝樣。這些重配劑的pH值通常在4.5-5。 這些已處于溶液狀態(tài)的蛋白分裝樣可用細(xì)胞培養(yǎng)液（或其它合適的緩沖液）進(jìn)一步稀釋到工作濃度。這樣一來(lái)，溶劑中少量的酸可被緩沖掉，可安全用于活細(xì)胞。

答：在重配劑中額外的BSA可以幫助細(xì)胞因子的回收、同時(shí)也增加穩(wěn)定性。R&D Systems用于干粉化溶液中的PSA的體積是極微的，所以用的PBS/BSA重配劑并不會(huì)得到2X鹽濃度。如果未按照資料單所述方式來(lái)重新配制，R&D Systems將不能保證產(chǎn)品的結(jié)果，因?yàn)槲覀兙褪沁@樣來(lái)質(zhì)量控制我們產(chǎn)品的。

答：R&D Systems將我們蛋白的分子量以千道爾頓（kDa）列在資料單上。大概換算率是：1道爾頓=1克/摩爾（即一個(gè)8千道爾頓的蛋白相當(dāng)于8,000克/摩爾）。

答：對(duì)細(xì)胞因子而言，業(yè)內(nèi)尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的單位。為避免混亂，R&D Systems有意識(shí)地將我們的蛋白以質(zhì)量為單位。普遍接受的定義是：一單位等同于某一實(shí)驗(yàn)的ED50值。很顯然，不同條件下的ED₅₀值會(huì)有所不同。如果遵循某一實(shí)驗(yàn)結(jié)果的單位，或以單位來(lái)比較不同供應(yīng)商的產(chǎn)品，必須首先確定產(chǎn)品來(lái)源的這一單位是如何定義的。當(dāng)*次用一批新產(chǎn)品或新來(lái)源時(shí)，R&D Systems強(qiáng)烈建議實(shí)驗(yàn)者先用樣本做一系列稀釋，建議以我們ED50范圍的中點(diǎn)作為稀釋的中點(diǎn)，上下各增加和減少5, 10, 20，甚至50倍。

答：這個(gè)抗體是針對(duì)6x組蛋白疊序的，我們建議使用的帶有交聯(lián)結(jié)合體的蛋白含有6x組蛋白標(biāo)簽。R&D Systems用這個(gè)抗體來(lái)交聯(lián)結(jié)合組蛋白標(biāo)簽，使得帶有組蛋白標(biāo)簽的蛋白具有更高的生物活性。R&D Systems質(zhì)控檢驗(yàn)這些經(jīng)過(guò)抗體交聯(lián)結(jié)合的蛋白，保證它們的ED₅₀與未經(jīng)交聯(lián)結(jié)合的蛋白的ED₅₀相符。所以，如不采用交聯(lián)結(jié)合抗體，不同批號(hào)之間的蛋白將有非常顯著的不同的ED₅₀。