答：沒有分裝試劑。R&D Systems公司不會分裝，也沒有授權任何公司進行分裝。目前市場上所謂的“RD分裝試劑”是沒有*的3無產(chǎn)品，R&D Systems公司不承擔任何“RD分裝試劑”的售后服務。在此，建議廣大客戶和經(jīng)銷商從R&D Systems中文上公布的正規(guī)經(jīng)銷商處訂購。

 

答：帶有AB的抗體是用G蛋白純化的，帶有IgG成分；帶有AF的抗體經(jīng)G蛋白純化后又經(jīng)抗原親和層析純化。所以，AF抗體為抗原特異性的IgG，而AB抗體含有與目標分析物非特異性的IgG。BAF是生物素化的AF抗體；MAB是單克隆抗體。

答：IgG的分子量是150kDa。它由兩條50kDa的重鏈和兩條25kDa的輕鏈組成。

答：R&D Systems不做抗原表位的定位?？贵w是針對整個免疫原（列在數(shù)據(jù)表中）的。

答：多克隆抗體有多個抗原表位識別位點?？贵w是針對整個免疫原（列在數(shù)據(jù)表中）的。

答：Thehalose是一種非還原糖（分子量為342.1）, 它在梅拉德式（Maillard）反應中與氨基酸和蛋白都不作用。它存在于許多植物和動物中。有報道稱Thehalose是穩(wěn)定蛋白抗御冰凍的zui有效抗凍劑，它使得蛋白抵御水分的能力增加從而使產(chǎn)品在重新溶解時不容易產(chǎn)生沉淀物。

答：Trehalose主要用于在冰凍和脫水過程中保護蛋白。它是非還原糖，在干粉化時呈非結晶狀。

 

 

 

答：因為有兩種不同的TUNEL方法可檢測細胞凋亡。*種方法采用TdT酶（末端脫氧核苷酸轉移酶）將生物素化的核苷酸加到組織中的DNA片段的3'-羥基端。加入正離子可使這種標記更有效，經(jīng)生物素化的核苷酸可用streptavidin-HRP共軛物和底物來檢測。

第二種方法仍采用TdT酶（末端脫氧核苷酸轉移酶）將核苷酸加到樣本中的DNA片段的3'-羥基端，但采用5-溴脫氧尿苷（BrdU）標記而非生物素，再用生物素化的抗5-溴脫氧尿苷（BrdU）抗體來檢測。采用這種方法的細胞凋亡檢測試劑盒包括：TA100 TACS-XL基本原位細胞凋亡試劑盒；TA200 TACS-XL DAB原位細胞凋亡試劑盒；TA300 TACS-XL藍色標記原位細胞凋亡試劑盒；TA400 TACS-XL補充細胞凋亡試劑盒；

答：Caspase活性測試為在細胞裂解液中檢測蛋白酶活性提供了簡捷方便的手段。當對專一Caspase的多肽底物被裂解時，釋放出的指示分子可用普通讀光儀或熒光讀板儀來做定量測定。將從細胞凋亡樣本得到的信號同未經(jīng)誘導的對照樣本進行比較，可以確定Caspase活性增加的倍數(shù)，而Caspase酶活性是同檢測到的信號直接成正比。

答：R&D Systems的Caspase活性測定試劑盒可作為半定量測試。檢測結果用于測量在細胞凋亡細胞中與未經(jīng)誘導細胞中的Caspase活性倍數(shù)的增加。實驗時，采用本底對照（無細胞裂解液或無底物的反應）。如果本底對照也有一定的讀數(shù)，這一讀數(shù)應當在記算倍數(shù)增加之前從試驗數(shù)據(jù)中差減。

答：Caspase活性檢測用于測定不同Caspase的蛋白酶的活性，表達為比未誘導樣本的倍數(shù)增加。Caspase ELISA試劑盒用于測定不同Caspase在樣本中的含量，以pg /mL定量表達。

答：大多數(shù)caspase會裂解所有的底物，它們根據(jù)Michaelis-Menton動力學趨于選擇某一底物而非另一底物，但沒有任何底物是對某一Caspase專一的。比如，Caspase 3和Caspase 7都可裂解DEVD底物；Caspase 9、4、5 都可裂解LEHD。R&D Systems為每一Caspase選擇了它所適宜的底物。 如果反應進行的太久，一些Caspase會激活另一些Caspase。

答：所有的Caspase活性檢測試劑盒中的細胞裂解液都是一樣的。所以，可用它裂解細胞，和用于多種Caspase活性的測試。

答：所有R&D Systems的Caspase抑制劑在N端有苯甲氧碳基（Z-）和FMK功能組，它們可穿孔細胞，是不可逆轉的。

答：R&D Systems提供多種重組Caspase酶，它們是理想的陽性對照。如果試驗者自己想建立一陽性對照，有許多可以產(chǎn)生細胞凋亡的陽性對照的方法都已發(fā)表。如果將細胞同2 mM星形孢菌素（Staurosporin）溫育2小時，可誘導絕大多數(shù)細胞類型進入細胞凋亡。R&D Systems有文獻資料列舉了對Caspase如何產(chǎn)生陽性對照，可向我們的技術服務索取。

 

 

 

答：R&D Systems為人的Quantikine ELISA試劑盒提供三重對照組。請同我們以便確定產(chǎn)品的目錄號。

答：首先要考慮的是重組蛋白的質量會高出試劑盒的可測試范圍數(shù)倍，必須將重組蛋白稀釋多次才能得到試劑盒的測試范圍。一般來說是從mg/毫升稀釋到pg/毫升，在這中間光是移液管的誤差就達到了可測量的水平。

其次要考慮的是R&D Systems的免疫測試方法測量的蛋白水平是用一種抗體捕獲的、用第二種抗體測定的，這種測定是在試劑盒研發(fā)時與標準蛋白校正過的。這些經(jīng)過測定的早期標準蛋白成為基本校正物，后來的標準都同它校正。這樣不同生產(chǎn)批號的免疫測定試劑盒將是一致的。這些基本校正物蛋白質量的測量方法也許與你的試劑管中蛋白質量的測定方法有所不同。

答：競爭ELISA基于競爭結合技術，即樣本中的待測分子與固定量的標記的同樣分子（我們一般用堿性磷酸酶作為標記）同時與固定在孔板上的抗體的同一結合位點進行競爭，參照標準曲線，試驗數(shù)據(jù)值是定量的。

答：夾層ELISA采用對樣本中分析物的特異的抗體作為固定化的捕獲抗體，然后用第二個帶標記的抗體作檢測，檢測抗體對分析物也是專一的。當參照標準曲線時，試驗數(shù)據(jù)值是定量的。

答：直接ELISA是將被測的分析物直接包膜在微孔板表面，然后用測試抗體來證實被測分析物的存在。當與重組蛋白（標準曲線）進行參照時，試驗數(shù)據(jù)值是半定量的。

答：R&D Systems Parameter品牌的ELISA試劑盒可以做6點的標準曲線、對照和41個樣本（每個樣本做雙份）。

答：大多數(shù)R&D Systems 的Quantikine品牌人的ELISA試劑盒可以做標準曲線、對照和40個樣本（每個樣本做雙份）。

答：Quantikine品牌的小鼠或大鼠的ELISA試劑盒中的每一微孔板可以做標準曲線、對照和39個樣本（每個樣本做雙份）。Quantikine品牌的小鼠或大鼠的ELISA試劑盒中，有些有兩個微孔板，有些只有一個微孔板。

答：在R&D Systems本部，我們用Costar的微孔板（目錄#2592）。Costar的是（800）492-1110。

答：為了ELISA，我們采用Serological Proteins的BSA（目錄#82-045）。Serological Proteins的是（815）937-8270。

答：R&D Systems的Quantikine ELISA試劑盒是一個完整的試劑盒。它包含了一個已包板的微孔板、酶標抗體、標準蛋白、稀釋劑、底物、終止劑、洗液和微孔板密封膜。所有試劑盒對實驗說明書中所列樣本都經(jīng)充分驗證，確保高質量。

答：DuoSet ELISA開發(fā)系統(tǒng)提供了足夠的捕獲抗體、測試抗體、標準蛋白和Streptavidin-HRP，可以做大約十五個96孔微孔板的實驗。我們還提供了樣本試驗流程和與這一系統(tǒng)配套的試劑。DuoSet ELISA開發(fā)系統(tǒng)主要是為高通量篩選細胞培養(yǎng)的上清液所設計，但熟悉ELISA研發(fā)的實驗人員已成功將其推廣到血清和血漿樣本的使用。

答：R&D Systems的抗體配對是一個自己動手的產(chǎn)品。R&D Systems建議此產(chǎn)品的使用者在免疫測試的開發(fā)方面應很有造詣。使用者必須以經(jīng)驗為依據(jù)來決定捕獲抗體和測試抗體的*濃度。R&D Systems的重組細胞因子并未經(jīng)ELISA校正，所以在使用前必須經(jīng)ELISA做質量校正。更多有關ELISA開發(fā)的信息可參照我們的《ELISA開發(fā)指導》 （: http://www.rndsystems.com/tsg_detail_objectname_elisa_development.aspx） 。

答：R&D Systems的Quantikine牌子的ELISA試劑盒是一種比色法檢測，需要一臺標準讀光儀配備有合適的濾光片可用于讀數(shù)和光波長校正。QuantiGlo ELISA試劑盒采用了一種熒光底物，計數(shù)為光流明或相對光單位（RLU）。因此，QuantiGlo ELISA試劑盒需要有熒光讀光儀。這種熒光讀光儀需設置在：1.0分鐘的滯待時間；1.0秒/孔的讀數(shù)時間；累計狀態(tài)；自動獲取開啟。R&D Systems使用Dynex Technologies的熒光讀光儀。

答：高靈敏Quantikine ELISA試劑盒一般用于非常低量的細胞因子的檢測，比如正常人（健康狀態(tài)時）的血清和血漿。當普通Quantikine試劑盒一般檢測不到（或幾乎檢測不到）正常人血清和血漿中的細胞因子，可選擇高靈敏Quantikine。我們建議實驗者先查閱文獻資料來確定試驗的測試范圍以選擇所需的試劑盒的種類。

答：很遺憾，R&D Systems尚未采用組織勻漿作為樣本對Quantikine系列的試劑盒做效果驗證。如果要決定試劑盒是否可用于未經(jīng)檢定的樣本，實驗者先做一個“摻入和回收預試驗”。簡單來說，實驗者將樣本分為兩份：一份中摻入一定量的試劑標準，然后做一稀釋系列（一般稀釋到1:16），再將摻入過的一份同未摻入的一份相比。采用以下的公式來計算回收率（%）：測試值（pg /毫升）/ 期待值（pg /毫升）x 100% = % 回收率。一般來說，回收率在80-120%可認為是可接受的。但是，可接受范圍應由每一實驗室自行決定。這種方法可用于檢定未被R&D Systems檢定的任何樣本。我們還有更加詳細的“摻入和回收”的實驗步驟，可向我們的技術服務部索取。我們也可進一步查閱文獻看一看是否有其他試驗人員用我們的產(chǎn)品做過不同的樣本，或不同的屬種。

答：因為稀釋劑是加入到所有的孔中，標準和被測樣本都被同樣稀釋，所以樣本的濃度可從標準曲線讀出，而不需作稀釋調整。

答：在任何情況下，我們都不支持超出確定范圍的實驗結果。在我們確定的測試范圍，我們保證實驗結果的可重復性。

答：靈敏度是統(tǒng)計中大于零的可測到的zui低值。它是通過本底信號和試驗的可變性計算出來的。靈敏度是將20個零復制物的中值加兩個標準差從標準曲線換算成分析物的濃度。而zui低標準是我們可以放心的、仍可與標準曲線成直線相關的zui低點，因而是可定量的。

答：如果試劑盒（RD1-, RD5-, RD6-）中的稀釋劑有相同的組件號和批量號，它們可以互換。R&D Systems做“整個試劑盒的質量控制”，就是說，我們不支持不同批號之間的替代。在任何情況下，微孔板和共軛物都不可互換。

答：如果組件號相同，洗液在相同類型的試劑盒之間（普通試劑盒之間，或高靈敏度試劑盒之間）是可以互換的。但是，普通Quantikine試劑盒中的洗液不能用于高靈敏度的試劑盒，在普通Quantikine試劑盒中的洗液含有磷酸，會干擾高靈敏度Quantikine試劑盒中由NADPH驅動的信號擴增。

答：有些細胞分子會粘到玻璃或聚苯乙烯（polystyrene），但不粘聚丙烯。

答：你可用細胞培養(yǎng)液來做起始的稀釋，直接移液到微孔板的zui終的1:10稀釋可使用校正物來稀釋。

答：有些RD1測試稀釋劑的確有不同程度的沉淀物。在這種情況下，我們在實驗步驟手冊中已做紀錄。

答：R&D Systems在研發(fā)和質控我們絕大多數(shù)的Quantikine ELISA試劑盒時，采用4-相參數(shù)的曲線擬合（又名為4-pl或sigmoidal曲線擬合）。一般來說，它比log-log和直線有更好的曲線擬合。如果數(shù)據(jù)分析不可用4-pl的話，log-log是下一個的選擇。

答：500 rpm使用的是0.12英寸的震蕩軌道。如果你的震蕩器用更大的震蕩軌道，500 rpm的確是過快了。在這種情況下，你應根據(jù)R&D Systems的建議重新調整震蕩速度。你可拿一個多余的96孔微孔板，加入洗液，洗液的量與實驗時孔中的溶液量一致；封板后，調整震蕩器的速度，直到液體在孔的上部劇烈旋轉但不濺到封膜上或產(chǎn)生泡沫為止。

答：zui大但不是*的兩個原因，可能是移液誤差和清洗方式。你可參照我們的《如何成功地操作ELISA指導》，：http://www.rndsystems.com/tsg_detail_objectname_elisa.aspx

答：主要有兩個原因：一，在絕大多數(shù)的樣本中細胞因子的含量非常高，如不經(jīng)稀釋，讀數(shù)將高于標準曲線；二，也是zui普遍的原因我們建議做稀釋，是將樣本中的干擾或基質效應稀釋掉。 

答：R&D System不建議對任何Quantikine ELISA延長溫育時間。而且，當實驗步驟改變了，我們無法保證Quantikine ELISA的實驗結果。R&D System做“整個試劑盒的質量控制”，就是說我們無法支持改變過的實驗步驟，因為它們未經(jīng)質量控制。延長溫育時間、或提高溫育溫度以縮短溫育時間會提高實驗的本底（又名空白或零標準）。這樣一來，樣本和標準中的低量細胞因子會測不到，因為增高了的本底信號將從所有孔中的數(shù)值中差減。

答：很多方面都會影響到顏色的產(chǎn)生。比如：

1）    BSA的干擾。選擇不含脂肪酸的ELIS*別的BSA很重要，可以降低球蛋白對實驗的干擾。R&D Systems建議使用Serological Proteins的BSA（目錄#82-045）。

2）    非室溫下的試劑在使用時會抑制信號；如果室溫過低，信號也會被抑制。

3）    如果使用了未表明為“高結合性ELISA”的微孔板，捕獲抗體同微孔板的結合就不牢固，從而導致測試的顏色產(chǎn)生過低。

4）    任何試劑，如果配制出錯、儲藏不當、或已過期，都將出現(xiàn)這一問題。

5）    讀板時使用的波長同低物的波長不一致。

答：若使用一家公司的抗體而用另一家公司的標準的帶來問題是它們會有不同的免疫活性（或不同的抗體與重組蛋白的結合力）。這種現(xiàn)象的出現(xiàn)是因為作為標準的重組蛋白同作為抗體免疫原的重組蛋白在蛋白序列或折疊中會有所不同，如果蛋白序列或折疊的不同發(fā)生在抗體結合部位，就會引起抗體對重組蛋白標準的不識別或識別很差。

 

 

 

答：R&D Systems的ELISpot測試采用了ELISA技術。先將對某一細胞因子專一的單克隆抗體固定于微孔板的PVDF膜上，再將經(jīng)適當刺激誘導的細胞移液到微孔中，然后將整個微孔板放置在保濕的370CCO₂培養(yǎng)箱中溫育特定的時間；在溫育的這段時間里，固定化的抗體與它們周圍分泌細胞析出的細胞分子結合；洗掉細胞和未結合的分子，加入對這一細胞因子有特異性的生物素化的多克隆抗體；清除未結合生物素化的抗體，加入經(jīng)streptavidin共軛的堿性磷酸酶；將未結合的酶從反應中洗除后，再加入底物溶液（BCIP/NBT）；一個藍黑色的沉淀（斑點）在細胞因子產(chǎn)生的位置形成，每一斑點代表了分泌特定細胞因子的細胞。這些斑點可用自動讀板系統(tǒng)（不同于普通讀光儀）讀出；或者，這些斑點也可用立體顯微鏡手控讀出。

答：ELISA實驗測量的是樣本中某一細胞因子的總量（一般表示為pg或ng /mL）；ELISpot實驗并不測定樣本中某一細胞因子的量，而是測定有多少細胞在分泌某一細胞因子。

答：R&D Systems的ELISpot試劑盒含有：對某一細胞因子有特異性的單克隆抗體（這一抗體已預先固定在微孔板的PVDF膜上）、生物素化的檢測抗體，Streptavidin共軛的堿性磷酸酶、BCIP/NBT產(chǎn)色物、和重組細胞因子陽性對照。試劑盒備有試驗所需所有的用品，試驗者不需再進行優(yōu)化。

     

R&D Systems的ELISpot開發(fā)試劑分為兩個必需組分，必須分別購買對細胞因子具有特異性的開發(fā)組件和ELISpot藍色組件。對細胞因子專一的開發(fā)組件包括對細胞因子特異的捕獲抗體和檢測抗體；ELISpot藍色組件（目錄#SE002）對所有R&D Systems的對細胞因子特異的開發(fā)組件都適用，它包含Streptavidin-堿性磷酸酶和BCIP/NBT產(chǎn)色物。

答：因為帶有PVDF膜的微孔板很靈敏，我們不能將微孔板做成條狀的形式。如溫育多次，我們將不能保證使用微孔板所得的實驗結果；因為微孔板不再無菌，所以未使用的微孔可能有污染。我們并不擔心*次使用時污染會有，因為大多數(shù)的細胞培養(yǎng)液都含抗菌素，而溫育時間又相對較短。我們選擇帶有的PVDF微孔板是因為它能比標準ELIS*別的聚丙乙烯（polystyrene）微孔板提供更好的實驗結果。

答：這個問題比較難回答，根據(jù)實驗要求而異。使用多少細胞有許多變量：比如細胞的大小、細胞的類型、分泌細胞因子的細胞的多少、誘導細胞的方法等。剛開始時，需要做一些細胞的稀釋（如，將每孔10,000,000個細胞稀釋到100,000甚至到10,000個細胞）來決定可形成明顯斑點的*細胞數(shù)。例如，如果微孔中的細胞已達到單層融合狀而大部分細胞分泌待測的細胞因子，形成的斑點就很難分開，這樣就很難定量檢測到分泌所測的細胞因子的細胞數(shù)；在這種情況下，應做一系列稀釋（titration），降低細胞數(shù)。如果在同樣的單層融合狀細胞中只有少數(shù)細胞分泌待測的細胞因子，形成的斑點就會很明顯，就很容易被定量測定；在第這種情況下，細胞數(shù)目就是合適的。所以，必須針對不同細胞類型和誘導方法來確定每孔中應加入細胞的*數(shù)目。

答：這是基于96孔微孔板的測試。除去陽性對照、陰性對照、本底（空白）和檢測抗體對照外，還剩下88孔，可做44個樣本（每個樣本做雙份）。

 

 

答：R&D Systems有一政策就是不給我們的蛋白和抗體產(chǎn)品提供生產(chǎn)日期或產(chǎn)品期限，從而限制產(chǎn)品的使用期限。在適當?shù)膬Υ鏃l件下，蛋白和抗體趨于穩(wěn)定多年。這些儲存條件包括以干粉形式儲存蛋白、或在蛋白濃度高于0.1毫克/毫升時冷凍（-20°C或-80°C）儲存蛋白并減少冷凍/解凍的次數(shù)。請參照每一產(chǎn)品插頁中的指示。我們公司常規(guī)的質量控制保證每一產(chǎn)品在售出時都具有生物活性。在實驗者收到產(chǎn)品后，我們無法控制產(chǎn)品的儲存狀況。我們愿以產(chǎn)品保證書來替代產(chǎn)品期限。在正常實驗條件下，我們保證R&D Systems的所有的產(chǎn)品將達到或超過我們公布的標準。

答：如果某一特定用途未列入我們的資料單，R&D Systems內部沒有更多的數(shù)據(jù)。我們的技術服務可以查閱我們的文獻庫，看一看是否有其他實驗人員發(fā)表過這一產(chǎn)品的這類用途、樣本類型、和/或種屬。

答：CF代表無攜帶物。一般來說，每1 mg的細胞因子都加有50 mg的BSA（攜帶蛋白）以穩(wěn)定細胞因子。無攜帶物的形式不含任何BSA。通常來說，帶有BSA的細胞因子比不帶攜帶物的細胞因子可在更低的濃度保存、有更長的貨架壽命。如果細胞因子是用于加入細胞/組織培養(yǎng)或作為ELISA的標準，可采用帶有BSA的細胞分子。當細胞因子是用于原位應用、標記細胞因子、或BSA會產(chǎn)生干擾的實驗時，應采用無攜帶物的細胞因子。

答：R&D Systems的重組人EPO（超純）目錄#286-EP-250，和我們的重組人EPO（組織培養(yǎng)級）目錄#287-TC-500，都有同樣的單位對質量的轉換。一單位的rhEPO大約是10 ng。

答：R&D Systems采用Serological Proteins的餾分V BSA（目錄#81-068）來重新配制蛋白溶液。Serological Proteins的是（815）937-8270。

答：Fc可以穩(wěn)定分子。R&D Systems利用Fc部分有趨于成雙聚體的傾向，創(chuàng)建有生物活性的雙聚體分子。以受體/ Fc嵌合體為例，與其可溶性受體相比，這種融合體輔助我們創(chuàng)建了可與它的配位體產(chǎn)生更高親和力性的受體。R&D Systems提供同樣的Fc部分作為對照。目錄是：110-HG，人的重組IgG/Fc。

答：采用酸性溶劑來重新配制某些細胞因子是非常關鍵的。因為有些細胞因子的等電子點很高，它們有*的疏水性。如不使用這種酸性重配劑， 這些細胞因子就很難全部溶于溶液中。因為同樣原因，我們還建議用同樣的酸性重配劑來儲存這些細胞因子的分裝樣。這些重配劑的pH值通常在4.5-5。 這些已處于溶液狀態(tài)的蛋白分裝樣可用細胞培養(yǎng)液（或其它合適的緩沖液）進一步稀釋到工作濃度。這樣一來，溶劑中少量的酸可被緩沖掉，可安全用于活細胞。

答：在重配劑中額外的BSA可以幫助細胞因子的回收、同時也增加穩(wěn)定性。R&D Systems用于干粉化溶液中的PSA的體積是極微的，所以用的PBS/BSA重配劑并不會得到2X鹽濃度。如果未按照資料單所述方式來重新配制，R&D Systems將不能保證產(chǎn)品的結果，因為我們就是這樣來質量控制我們產(chǎn)品的。

答：R&D Systems將我們蛋白的分子量以千道爾頓（kDa）列在資料單上。大概換算率是：1道爾頓=1克/摩爾（即一個8千道爾頓的蛋白相當于8,000克/摩爾）。

答：對細胞因子而言，業(yè)內尚無統(tǒng)一標準的單位。為避免混亂，R&D Systems有意識地將我們的蛋白以質量為單位。普遍接受的定義是：一單位等同于某一實驗的ED50值。很顯然，不同條件下的ED₅₀值會有所不同。如果遵循某一實驗結果的單位，或以單位來比較不同供應商的產(chǎn)品，必須首先確定產(chǎn)品來源的這一單位是如何定義的。當*次用一批新產(chǎn)品或新來源時，R&D Systems強烈建議實驗者先用樣本做一系列稀釋，建議以我們ED50范圍的中點作為稀釋的中點，上下各增加和減少5, 10, 20，甚至50倍。

答：這個抗體是針對6x組蛋白疊序的，我們建議使用的帶有交聯(lián)結合體的蛋白含有6x組蛋白標簽。R&D Systems用這個抗體來交聯(lián)結合組蛋白標簽，使得帶有組蛋白標簽的蛋白具有更高的生物活性。R&D Systems質控檢驗這些經(jīng)過抗體交聯(lián)結合的蛋白，保證它們的ED₅₀與未經(jīng)交聯(lián)結合的蛋白的ED₅₀相符。所以，如不采用交聯(lián)結合抗體，不同批號之間的蛋白將有非常顯著的不同的ED₅₀。